ELISA試劑盒血液中的淋巴細胞通過高內(nèi)皮靜脈（high endothelialvenules，HEVs）進入淋巴結(jié)中。這一過程首先是由一些地址素（addressin）的引導，其中包括a4b7的受體MadCAM-1以及CD62L的受體PNAd。在剛出生的小鼠中，MAdCAM-1的表達量較高，隨著時間的推移，大約兩周以后，PNAd的表達量占據(jù)主導地位。這一上調(diào)引導了基于L-選擇素（L-selectin）的成體淋巴細胞歸巢的效應。有報道指出，一類表達趨化因子受體CCR7的樹突狀細胞（DC）能夠進入次級淋巴器官，進而促進高內(nèi)皮靜脈（HEV）的發(fā)育，但這類DC的活動是否受到腸道微生物的調(diào)節(jié)仍未可知。
在SPF小鼠中，腸道相關(guān)淋巴結(jié)的發(fā)育受到一系列轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控，包括ID2, IRF8, Batf3, IRF4。同時也受到 Notch2-依賴型RALDH+&CD11b+CD103+DC的調(diào)控。這類DC十分特殊，有報道指出這類DC能夠?qū)⒊Ｒ?guī)CD4+T細胞轉(zhuǎn)變?yōu)檎T導型Treg細胞，以及誘導淋巴細胞的歸巢行為。因此，這類細胞很可能受到腸道微生物的調(diào)節(jié)，進而影響淋巴結(jié)的發(fā)育。
對此，來自清華大學醫(yī)學院免疫學研究所的石彥教授課題組利用無菌培養(yǎng)小鼠模型與基因表達譜分析手段，證明了腸道微生物對RALDH+DC以及淋巴結(jié)發(fā)育的影響。相關(guān)結(jié)果發(fā)表在zui近一期的《Immunity》雜志上。
首先，為了證明無菌小鼠中外周淋巴結(jié)的發(fā)育缺陷現(xiàn)象是由淋巴細胞歸巢能力下降導致的，作者們利用CFSE標記了一定量的淋巴結(jié)細胞并通過尾靜脈注射的方式分別導入SPF小鼠與GF（即無菌）小鼠體內(nèi)。實驗結(jié)束24小時之后，在SPF小鼠以及GF的腹股溝淋巴結(jié)，腸系膜淋巴結(jié)以及脾臟中都檢測到了CFSE陽性的細胞群體。但是，相比于脾臟，GF小鼠的腹股溝淋巴結(jié)以及腸系膜淋巴結(jié)中的CFSE陽性細胞數(shù)量明顯低于SPF小鼠。進一步的細胞特征分析也表明，CD4+T細胞，CD8+ T細胞，以及CD19+B細胞數(shù)量都明顯減少。同時，作者發(fā)現(xiàn)五周左右的GF小鼠腹股溝淋巴結(jié)HEV中MAdCAM-1的表達量仍未下調(diào)，而PNAd的表達量也未明顯上調(diào)，GF小鼠的淋巴結(jié)大小也明顯低于SPF小鼠。通過將SPF小鼠與GF小鼠進行一段時間的共室培養(yǎng)后，作者發(fā)現(xiàn)GF小鼠HEV中兩類地址素的表達量特征開始與SPF小鼠靠攏。這說明腸道微生物可能影響了HEV的生理特征。之后，作者將GF小鼠與SPF小鼠不同淋巴結(jié)的RNA提取出來并進行了深度測序。有意思的是，MAdCAM-1與PNAd-1的RNA表達水平并沒有明顯差異。這說明這一蛋白水平的差異可能是由于轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的變化導致的。有意思的是，SPF小鼠中與脂肪代謝以及視黃酸信號通路的相關(guān)基因表達量明顯高于GF小鼠ELISA試劑盒。
ELISA試劑盒維他命A（VitA）富集于脂肪細胞中，它能夠激組織分化過程中的視黃酸（RA）信號。視黃酸脫氫酶（RALDH）能夠?qū)⒕S生素的衍生物-視黃醛，轉(zhuǎn)變?yōu)橐朁S酸。為了檢測SPF小鼠中RALDH的表達量，作者利用CD1特異性視黃酸-beta-乳酸脫氫酶報告基因小鼠，提取了體內(nèi)的腹股溝淋巴結(jié)細胞并進行了體外培養(yǎng)與孵育與檢測。結(jié)果顯示，在SPF小鼠的腸系膜淋巴結(jié)（MLN）中，有1%為RALDH+細胞，然而在GF小鼠中難以檢測到。相似結(jié)果也出現(xiàn)在PP，LP中。之后，作者將GF小鼠與SPF小鼠進行了共同孵育。結(jié)果顯示：共同孵育之后GF小鼠的淋巴結(jié)中RALDH+細胞的數(shù)量明顯上調(diào)。
由于之前一致認為RALDH+細胞主要存在于大腸中，那么外周淋巴結(jié)中pLN的存在表明其可能具有此前未知的生理功能。為了證實這一猜想，作者提取了SPF小鼠體內(nèi)的RALDH+ 細胞并將其通過靜脈注射的方式導入五周左右的GF小鼠體內(nèi)。7天以后，再次將CFSE標記的SPF LN細胞通過靜脈注射的方式導入小鼠體內(nèi)并觀察其歸巢能力。結(jié)果顯示：在RALDH+細胞導入的小鼠中，CFSE+細胞向mLN，iLN中歸巢的能力明顯高于對照組。這說明RALDH+細胞的確能夠影響淋巴細胞的歸巢行為。
之后，作者希望了解腸道微生物是如何影響RALDH+細胞的生理功能的。首先，作者對這部分RALDH+細胞進行了鑒定，證明它們的確屬于腸道分布的CD103+ CD11b+DC，進而表明腸道微生物的存在能夠引起這部分細胞從腸道向外周淋巴結(jié)遷移。之后，作者利用不同類型的抗生素進行處理，發(fā)現(xiàn)RALDH+DC的遷移受到一類叫做"熱帶假絲酵母"的腸道真菌的調(diào)控。